¿Conoce las Nuevas Columnas para Bio-Cromatografía de Thermo Fisher Scientific?

PARTE I: Ácidos Nucleicos

Columnas DNAPac y DNASwift

La serie de columnas de intercambio aniónica de base polimérica DNAPac® impone el estándar en el análisis de la pureza de oligonucleótidos, su análisis rápido y su purificación.

Hay dos tipos de columnas disponibles: DNAPac PA100 y DNAPac PA200. Ambas son columnas de intercambio aniónico fuerte desarrollada para el análisis de alta resolución y la purificación de oligonucleótidos sintéticos y modificados. DNAPac PA200 ofrece una mayor eficacia y estabilidad bajo condiciones alcalinas y resultan excelentes en:

  • Separación en Alta Resolución de nucleótidos y ácidos nucleicos
  • Permite la resolución n, n-1 de oligonucleótidos
  • Compatible con solventes, alto pH y temperaturas
  • Fácil escalado

Estas columnas permiten el barrido de oligonucleótidos sintéticos para producción y secuenciación de fallos en modo rutina, demostrando la resolución a unidad de base de oligonucleótidos sintéticos de hasta 60 bases y más, con una resolución no superada para longitudes completas de n-1, n+1 y otros fallos de secuencia. DNAPac PA200RS dispone de un menor tamaño de partícula, 4 mm, para generar una mayor resolución.

Resolución de oligonucleótidos blanco, fallo y tritil-on.
Resolución de oligonucleótidos blanco, fallo y tritil-on.
Separación de Oligonucleótidos que difieren por un ácido nucleico. La columna DNAPac PA200 RS en formato 4.6 × 150 mm muestra una mayor sensibilidad en comparación con la columna estándar DNAPac PA200 de 4.0 x 250 mm.
Separación de Oligonucleótidos que difieren por un ácido nucleico. La columna DNAPac
PA200 RS en formato 4.6 × 150 mm muestra una mayor sensibilidad en comparación con la columna estándar DNAPac PA200 de 4.0 x 250 mm.

Si opta por separaciones en Fase Inversa, la columna DNAPac RP utiliza una resina polimérica esférica de poro ancho de 4mm, altamente estable a pH extremos (0-14) y amplios rangos de temperatura (5-110ºC). Es compatible con fases móviles adecuadas para Espectrometría de Masas Directa y reactivos de Par Iónico como Trietilamina (TEA) y Hexilamina (HA).

La columna es apta para HPLC y UHPLC, ofrece separaciones rápidas y de alta resolución de oligonucleótidos y resuelve fragmentos pequeños o muy grandes de segmentos de dsDNA.

Separación rápida de 12-40mer deoxithimidinas (dTs)
Separación rápida de 12-40mer deoxithimidinas (dTs)

Thermo Scientific™ DNASwift® SAX-1S es una columna de intercambio aniónico fuerte que ofrece un purificación en alta  de oligonucleótidos con un rendimiento y pureza superior a la de otras columnas disponibles de intercambio o de fase reversa. La columna DNASwift® resulta ideal para investigación terapéutica y diagnóstica, campos que requieren oligonucleótidos de muy alta pureza y rendimiento.

  • La mayor resolución disponible en la purificación de oligonucleótidos, que permite la máxima pureza y rendimiento.
  • Capacidad excepcionalmente alta, con altos rendimientos y pureza.
  • Control de la selectividad vía pH, sal y solventes
  • Compatible con solventes, alto pH y altas temperaturas

Las columnas DNASwift® SAX-1S de tipo monolítico han sido especialmente desarrolladas para ofrecer alta resolución y purificación a escala de laboratorio de oligonucleótidos por cromatografía de intercambio aniónico. El uso de estos compuestos en investigación terapéutica y diagnóstica se está desarrollando muy rápidamente y han de obtenerse con la máxima pureza:

DNASwift® SAX-1S ofrece un un rendimiento y pureza superior a la de otras columnas disponibles de intercambio o de fase reversa.

DNASwift® SAX-1S se basa en un polímero de tipo monolítico único, especialmente diseñado para la purificación de oligonucleótidos, estable químicamente y frente a la presión. El polímero está recubierto de Nanobeads™ de látex funcionalizados con grupos de intercambio aniónico fuerte, similares a los disponibles en las columnas líderes del mercado DNAPac, que contribuyen a la excepcionalmente alta resolución y control de la selectividad de DNASwift. El monolito poroso ofrece, también, una contrapresión baja y mayores caudales con una pérdida mínima de resolución, haciéndola ideal en la investigación y purificación de oligonucleótidos difíciles.

Purificación de 125 ug de una muestra de RNA con 21 bases con enlaces aberrantes 2’-5’ en la posición 1 y 3 desde el final 3’.
Purificación de 125 ug de una muestra de RNA con 21 bases con enlaces aberrantes 2’-5’ en la posición 1 y 3 desde el final 3’.
Análisis de una muestra del crudo de la figura anterior y de la fracción 20 purificada con una columna DNASwift.
Análisis de una muestra del crudo de la figura anterior y de la fracción 20 purificada con una columna DNASwift.