Introducción

Se describe un método de Extracción y  purificación para la determinación por LC-MS de cinco micotoxinas, inclusive tres del grupo Tricotecenos A (DAS, T-2 y HT-2) y dos del grupo Tricotecenos B (DON, NIV).

El análisis se ha optimizado mediante un clean-up por QuEChERS modificado. Estas micotoxinas son responsables de una amplia familia de desórdenes en animales, de la inhibición de la síntesis de proteínas y tener efectos citotóxicos e inmunosupresores.

Los riesgos sanitarios asociados a la exposición humana a estas toxinas han sido reconocidos mundialmente y dependen de dietas particularmente basadas en cereales como el maíz o el trigo que son las mayores fuentes de tricocetenos.

Procedimiento

1. Preparación de la muestra

• Homogeneizar la muestra de grano con un molino de laboratorio
• Pesar 5 g de muestra en un tubo de centrífuga de 50 mL
• Añadir 10 mL me Metanol:Acetonitrilo (85:15)
• Agitar para dispersar
• Añadir el contenido del sobre JO3920 que contiene 4g de Sulfato de Magnesio anhidro y 1 g de Cloruro de Sodio al tubo de centrífuga.
• Agitar durante 1 minuto y centrifugar a 4.000 rpm durante 10 minutos

2. Cleanup de la muestra

• Transferir 1 mL del sobrenadante a un tubo JO3930 (150 mg de Sulfato de Magnesio anhidro y 50 mg de PSA)
• Agitar durante 1 minuto y centrifugar a 4.000 rpm durante 10 minutos
• Filtrar a través de un filtro de  0.45 μm a un vial de inyección para LC si el sobrenadante no clarifica.
• La muestra ya está disponible para el análisis

3. Análisis

• Detector MSD con API configurada para Electrospray en modo iónico positivo
• Columna analítica: Strategy C18-2 (250mm x 4.6 mm x 5 μm) (P/N: US0620) o Thermo Scientific™ Hypersil GOLD™,
  50 × 4.6 mm, 5 μm (P/N: 25005-054630) o Hypersil GOLD™ 50 x 2.1 mm, 1.9 μm (P/N: 25002-052130) o Hypersil GOLD aQ™  100 mm × 2.1 mm i.d., 1.9 μm (P/N: 25302-102130)
• Fase Móvil A: 1% HCOOH en H2O.  Fase Móvil B: 1% HCOOH en MeOH.
• Gradiente 40% B, 10 minutos hasta 90% B 25 minutos. Caudal 0.5 mL/min (columna Strategy C18-2).

3.1. Iones para Cuantificación

3.2. Cromatograma