Los kits de digestión Thermo Scientific™ SMART Digest™ con su diseño basado en tripsina inmovilizada térmicamente estable, permiten aplicaciones biofarmacéuticas y proteómicas que requieran análisis rápidos, muy reproducibles y de alta sensibilidad, especialmente en flujos de trabajo de alto rendimiento.
Retos de los laboratorios de investigación biofarmacéutica y proteínas
Los modernos laboratorios en biofarmacia y proteínas han de ofrecer resultados analíticos de alta calidad, especialmente en ambientes en que la velocidad es relevante. La preparación de muestras es un claro cuello de botella en la consecución de esos objetivos, pues las tecnologías actuales están sujetas a bajos niveles de reproducibilidad, sensibilidad pobre, métodos no automatizables y que requieren a menudo 24 horas para conseguir una digestión completa.
Para alcanzar las demandas específicas de esta industria el flujo de trabajo analítico debería permitir:
- Alta reproducibilidad
- Alta sensibilidad
- Altos niveles de calidad de datos
- compatibilidad con automatización
El Kit SMART Digest es la vía simple para implementar y satisfacer esas demandas y ofrece beneficios significativos sobre los protocolos convencionales existentes de digestión en solución:
- Significativamente más rápido
- Protocolo de preparación de muestras de 3 etapas
- Mayor productividad
- Automatizable
- Mayor reproducibilidad
- Superior sensibilidad
Los protocolos de preparación de muestras para la digestión de proteínas son laboriosos y complicados: se producen errores, poca reproducibilidad y baja velocidad.
El Kit SMART Digest supera esas barreras con un método de simple implementación de tres etapas (ver Figura 1).
SMART Digest permite una gran confianza en los datos obtenidos y una superior reproducibilidad y, además, puede ser automatizado.
Digestión completa en 60 minutos
SMART Digest no es sólo simple. sino que además reduce significativamente el tiempo necesario desde la preparación de la muestra hasta el análisis: típicamente menos de 60 minutos, en función de la complejidad de la muestra como muestra la muestra de lgG (ver Figura 2 y Figura 3 ).
Reproducibilidad
El Kit SMART Digest mejora sensiblemente la reproducibilidad en comparación con los protocolos existente, con el resultado de menores pérdidas de muestra, mayor rendimiento y la habilidad de obtener datos más consistentes.
El cromatograma siguiente muestra 13 registros superpuestos de páptidos mAb de ratón, extraídos de plasma humano y procesados con el Kit SMART Digest.
Se obtiene una excelente reproducibilidad de <0.082%RSD, tal como muestra la tabla 1.
Sensibilidad y calidad de los datos
El Kit SMART Digest permite un mayor cubrimiento de secuencia gracias a la eliminación de las estabas de reducción y alquilación en ausencia de tripsina. La reducción de procesos químicos intermedios, la ausencia de tripsina en la muestra final y la reducción de modificaciones translacionales permiten una menor supresión de señal durante el análisis LC-MS.
El grafico siguiente (ver Figura 4) muestra que la tiroglobulina de plasma humano, digerida con el Kit SMART Digest, ofrece mayores niveles de sensibilidad en comparación con el protocolo de digestión de 20h tradicional.
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