La Cromatografía de Fase Inversa (RPC) de péptidos permite a la industria biofarmacéutica obtener información sobre la naturaleza y calidad de las proteínas terapéuticas. La Cromatografía de Fase Inversa en combinación con detección UV es de uso común en estudios de estabilidad, control de procesos, control de calidad y otros casos en los que los atributos importantes de la secuencia de péptidos se extrapolan directamente del cromatograma.
En éste último caso, la asignación de un péptido a un pico se basa en la comparación del tiempo de retención entre la muestra investigada y la de referencia, siempre que la identidad de los compuestos de el cromatograma de referencia haya sido determinada previamente por Espectrometría de Masas (LCMS).
Puesto la asignación de la identidad del pico se basa únicamente en el tiempo de retención resulta necesaria una extrema precisión en de los mismos análisis a análisis para evitar identificaciones incorrectas. El uso de protocolos de digestión lentos (a veces 24 horas) y potencialmente poco reproducibles puede complicar todavía más la identificación. ya que tienen un elevado potencial de modificaciones post-translacionales (PTM) y autolisis, que causan variaciones en el perfil del cromatograma.
Los kits de digestión Thermo Scientific™ SMART Digest™ con su diseño basado en tripsina inmovilizada térmicamente estable, permiten eliminar estos inconvenientes al proporcionar un proceso de digestión mucho más simple, con digestiones rápidas, muy reproducibles y de alta sensibilidad en comparación con los métodos tradicionales.
Reproducibilidad
El Kit SMART Digest mejora sensiblemente la reproducibilidad en comparación con los protocolos existente, con el resultado de menores pérdidas de muestra, mayor rendimiento y la habilidad de obtener datos más consistentes.
El cromatograma siguiente muestra 13 registros superpuestos de páptidos mAb de ratón, extraídos de plasma humano y procesados con el Kit SMART Digest y analizados con un equipo de UHPLC Vanquish con bombas de pulsación extremadamente baja que permiten la generación de un caudal extremadamente estable y la formación de gradientes muy precisos. La columna utilizada, Acclaim RSLC 120 C18, 2.2μm de 2.1x250mm, genera la alta resolución requerida por el método.
Cómo pedir
Más Información
Visite las siguientes entradas si desea más información sobre las nuevas columnas para biocromatografía de Thermo Scientific:
- Determinación de la Concentración de mAb por Cromatografía de Afinidad)
- Separación de Agregados por Cromatografía de Exclusión (SEC)
- Análisis de Variantes de Carga por Cromatografía de Intercambio Iónico (IEC)
- Análisis de Variantes por Oxidación por Cromatografía de Interacción Hidrofóbica (HIC)
- Análisis de Conjugados Anticuerpo-Droga (ADC) por Cromatografía de Interacción Hidrofóbica (HIC) y de Fase Inversa (RP)
- Análisis de mAB’s Intactos y Fragmentos de mAb’s por Cromatografía de Fase Inversa (RPC)
- Mapa de Péptidos por Cromatografía de Fase Inversa (RPC)
- Análisis de Glicanos por Cromatografía de Modo Mixto (MMC) y Cromatografía de Interacción Hidrofílica (HILIC)
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