ADCs, AFINIDAD, BIOCROMATOGRAFÍA, HIC, HPLC, MAbs

¿Conoce las Nuevas Columnas para Bio-Cromatografía de Thermo Fisher Scientific?

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PARTE II: Análisis de Péptidos y Proteínas

Columnas PepMap y PepSwift

Los miembros de las familias Acclaim® PepMap™ y Acclaim PepMap RSLC han sido diseñadas para la separación eficiente de péptidos y proteínas.

Estas fases estacionarias basadas en sílice no tienen virtualmente ninguna actividad silanofílica, lo que produce picos con colas mínimas. Las columnas Acclaim PepMap pueden trabajar sin TFA, haciéndolas ideales para análisis bio-moleculares por LCMS.

  • Sin Interacciones silanofílicas
  • Separaciones de Péptidos: C18 y C8 100 Å de 2, 3 µm o 5 µm
  • Separaciones de Proteínas: C18 y C4 300 Å de 5 µm
  • LCMS sin TFA para una superior sensibilidad
  • Increíble eficacia de separación
  • Superior resolución y recuperación

Las columnas Acclaim PepMap Trap y Nano-Trap están disponibles para inyecciones de gran volumen de muestras diluidas o en técnicas de conmutación de varias columnas. Al permitir cargas en tiempos substancialmente menores se reduce en tiempo de análisis total. El desalado o eliminación SDS antes del análisis por MS, el enriquecimiento de fosfohéptidos o la Cromatografía Multidimensional (MDLC 2-D y 3D) son otras aplicaciones.

Separación en Resolución Ultra Alta de una muestra de digerido tríptico de lisado celular de E. coli en columna Acclaim PepMap RSLC 75 µm i.d. × 50 cm , 2 µm C18. A 270 nL/min se obtiene una capacidad de pico de 750. Detección con Trampa Iónica.
Separación en Resolución Ultra Alta de una muestra de digerido tríptico de lisado celular de E. coli en columna Acclaim PepMap RSLC 75 µm i.d. × 50 cm , 2 µm C18. A 270 nL/min se obtiene una capacidad de pico de 750. Detección con Trampa Iónica.
Columnas Monolíticas Acclaim® PepSwift™ para en análisis rápido y en alta resolución de proteínas y péptidos.

Las columnas monolíticas Acclaim® PepSwift™ han sido especialmente diseñadas para la separación e identificación rápida de péptidos y proteínas mediante nano LC y LC capilar y detección MS. Estas fases estacionarias, basadas en un lecho de copolímero poliestireno-divinilbenceno, ofrecen una alternativa de alta calidad a los sorbentes tradicionales microparticulados, con importantes ventajas en aplicaciones de alta sensibilidad en proteómica.

  • Fases estacionarias poliméricas monolíticas
  • Separaciones de alta velocidad de Péptidos y Proteínas (<10 minutos)
  • Alta eficacia (>200.000 platos/m)
  • Alta reproducibilidad columna a columna
  • Elevada sensibilidad en MS
  • Superior vida útil
  • Disponible en D.I. de 100, 200 y 500 μm
  • Disponible en 5 y 25cm (sólo 100 y 200μm
  • Conectores nanoViper

Las columnas Acclaim PepSwift Trap pueden utilizarse para concentrar y desalar muestras de péptidos y proteínas sin impacto negativo en las prestaciones cromatográficas o recuperación de los compuestos. Se pueden usar varios agentes de par iónico en el solvente de carga y/o en las fases móviles para cambiar la selectividad de la separación o mejorar la eficacia de atrapamiento.

Columnas Thermo Fisher Scientific Acclaim MAbPac, para Anticuerpos Monoclonales

Thermo Fisher Scientific ofrece columnas poliméricas y basadas en sílice para la separación de mAb’s por:

  • Cromatografía de Intercambio Iónico (IC)
  • Cromatografía de Afinidad (AC)
  • Cromatografía de Exclusión (SEC)
  • Columnas de Interacción Hidrofóbica (HIC)
  • Cromatografía de Fase Inversa (RPC)

Cada una de estas columnas de eficacia ultra-alta genera la resolución suficiente para permitir la separación de isoformas de proteínas que, en muchos casos, difieren solamente por un único residuo de aminoácido.

La familia  Acclaim MAbPac para el análisis de Anticuerpos Monoclonales está formada por las siguientes columnas:

  • MabPac SEC-1.  Columna de exclusión especialmente diseñada para el análisis de anticuerpos monoclonales, inclusive la separación de monómeros, agregados y fragmentos
  • MAbPac SCX-10. Columna de Intercambio Catiónico fuerte especialmente diseñada para el análisis de alta resolución y eficiencia de anticuerpos monoclonales y sus variantes.
  • MAbPac Protein A. Columna de Afinidad diseñada para la determinación rápida y precisa de la concentración de anticuerpos monoclonales (MAb) en cultivos celulares de recolección (HCC).
  • MAbPac HIC-Butyl, MAbPac HIC-10 y MAbPac HIC-20. Columnas de Interacción Hidrofóbica (HIC) diseñadas para  la separación de anticuerpos monoclonales (mAbs) y conjugados anticuerpo-droga (ADCs), separación de mAbs/proteínas intactos y agregados mAb y  separar fragmentos de mAbs, mAbs oxidados y mAbs bioespecíficos respectivamente.
  • MAbPac RP.  Columna de Fase Inversa diseñada para la caracterización por Cromatografía de Fase inversa (RP) y LCMS de anticuerpos monoclonales (mAbs), fragmentos, variantes conjugados de drogas con anticuerpos (ADC’s), proteínas PEGiladas y biospecíficas
El Cromatograma muestra el análisis de un MAb en Tampón AcAm100 mM ammonium acetate buffer, tanto en MAbPac SEC-1 (PEEK) y una columna competidora. El caudal y el volumen de inyección se han ajustado a las dimensiones de la columna para asegurar condiciones equivalentes. La columna MAbPac SEC-1 ofrece una superior eficacia, forma de pico, sensibilidad y recuperación..
El Cromatograma muestra el análisis de un MAb en Tampón AcAm100 mM, tanto en MAbPac SEC-1 (PEEK) y una columna competidora. El caudal y el volumen de inyección se han ajustado a las dimensiones de la columna para asegurar condiciones equivalentes. La columna MAbPac SEC-1 ofrece una superior eficacia, forma de pico, sensibilidad y recuperación..
Resolución a línea de base de Variantes C-terminal lisina de una muestra de MAb.. El segundo cromatograma verifica que los tres picos principales se deben a variantes en contenido C-terminal tras el tratamiento con carboxipeptidasa B, solo permanece un pico mayoritario.
Columna MAbPac SCX-10. Resolución a línea de base de Variantes C-terminal lisina de una muestra de MAb.. El segundo cromatograma verifica que los tres picos principales se deben a variantes en contenido C-terminal: tras el tratamiento con carboxipeptidasa B, solo permanece un pico mayoritario.
Purificación de cultivo celular (HCC) en la columna MAbPac Protein A (4 × 35 mm).
Purificación de cultivo celular (HCC) en la columna MAbPac Protein A (4 × 35 mm).
La columna MAbPac HIC-Butyl resuelve el mAb sin modificar y los ADC con valores DAR sw 2 a 8.
MAbPac HIC-Butyl resuelve el mAb sin modificar y los ADC con valores DAR de 2 a 8.
HIC-Sel
Selección de la columna MAbPac HIC en función de la aplicación.

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