APLICACIONES, FASE PELICULAR, HPLC, MODO MIXTO

Como obtener buenos resultados en HILIC. Parte 4: Resolución de Problemas

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Resolución de problemas comunes en HILIC

HILIC Column CareEsta parte intenta ofrecer soluciones específicas para los problemas cromatográficos más usuales en HILIC.

No ha de ser considerada una Guía completa en la resolución de problemas debidos a las columnas o al instrumento, en cuyo caso recomendamos se haga una lectura detallada de los manuales correspondientes.

Se cubrirán los puntos siguientes:

  • Solubilidad
  • Tampones permitidos
  • Reproducibilidad en la retención
  • pH extremos que afecten a la estabilidad de la columna
  • Inyección de solvente
  • Volumen de inyección
  • Lavado de Jeringas

Retención del Analito Insuficiente

Figura 1. Retención insuficiente
Figura 1. Retención insuficiente

Tabla 1. Causas de baja retención en HILIC

Tabla 1. Causas de baja retención en HILIC

Deriva del Tiempo de Retención

Fifura 5. El tiempo de reequilibrado tras un gradiente ha de ser de almenos 20 CV.
Figura 2. El tiempo de reequilibrado tras un gradiente ha de ser de al menos 20 CV.
Tabla 2. Causas de la pérdida de retención e HILIC
Tabla 2. Causas de la pérdida de retención e HILIC

Forma de Pico Pobre (Ensanchamiento de Banda)

Figura 3. Forma de pico pobre
Figura 3. Forma de pico pobre
Tabla 3. Causas y soluciones para picos distorsionados o anchos
Tabla 3. Causas y soluciones para picos distorsionados o anchos

Tampones permitidos en HILIC

Tabla 4. Selección de Tampones en HILIC
Tabla 4. Selección de Tampones en HILIC

Como cuidar su columna HILIC

Le indicamos algunas guías generales para el cuidado, uso y almacenamiento de columnas HILIC. Indicaciones más precisas las puede conseguir el manual de uso de cada columna

Como con cualquier otra columna, para maximizar la vida de la columna HILIC, asegúrese que tanto las muestras como las fases móviles están libres de partículas.

El uso de precolumnas o filtros en línea entre la válvula de conmutación y la columna también resultan recomendables, especialmente con muestras que puedan contener material particulado u otros contaminates.

Tabla 5. Consejos de mantenimiento de columnas HILIC.
Tabla 5. Consejos de mantenimiento de columnas HILIC.

 Como se caracterizan las Fases HILIC

La Tabla 6 muestra una serie de sondas utilizadas en las caracterización de las fases estacionarias HILIC.

Las condiciones cromatográficas son:

  • Fase Móvil 90:10 (v/v) Acetonitrilo:Ac. Amónico (20 mM, pH 4.7)
  • Caudal 0.5 mL/min
  • Detector: UV 254 nm
  • Volumen Inyección: 5 μL
  • Temperatura Columna: 30ºC
Tabla 6. Sondas cromatográficas usadas para caracterizar fases HILIC
Tabla 6. Sondas cromatográficas usadas para caracterizar fases HILIC

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