Desalados más eficientes
El Cartucho Thermo Scientific™ MSPac™ DS-10 reduce la contaminación de fondo y el ruido que se observa frecuentemente en análisis por LC-MS de muestras que contengan sales no volátiles. La eliminación de esas sales antes el análisis mejora la respuesta del analito, incrementa la relación señal/ruido y mejora la sensibilidad y asegura una identificación más fiable.
- Bajo arrastre de pico para una mayor fiabilidad muestra a muestra.
- Alta capacidad en desalado de anticuerpos y proteínas en identificación, búsqueda de biomarcadores y biología de sistemas.
- La estabilidad a alto pH permite una vida útil superior con muestras alcalinas.
- Excelente con fracciones salinas de IEX, gradiente de pH, SEC etc
Superior Sensibilidad en Análisis LC-MS
El cartucho de desalado MSPac DS-10 reduce la contaminación y el ruido de fondo observable en análisis L-MS de muestras que contienen sales no volátiles. La eliminación de esas sales antes del análisis mejora la respuesta del analito y la sensibilidad ayudando a una identificación mejor en MS. El cartucho puede usarse solo o en combinación con una columna analítica para separaciones de alta resolución.
Fiabilidad Muestra a Muestra
El cartucho de desalado MSPac DS-10 ha sido desarrollado para ser robusto y capaz de tratar muestras de matriz compleja sin arrastre (sin contaminación cruzada) significativo.
Alta Capacidad de Carga
El cartucho MSPac DS-10 puede ser usado on-line con muestras biológicas para su posterior análisis por LC-MS en condiciones de Fase Inversa. Su elevada capacidad de carga lo hace adecuado para identificación y cuantificación en investigación clínica, búsqueda de biomarcadores y aplicaciones de biología de sistemas.
Tecnología
La fase de desalado MSPac DS-10 es una resina de copolímero divinilbenceno de 5 μm. Las fases de RPC retienen las proteínas bajo condiciones acuosas mientras que las sales y los componentes hidrofílicos de la matriz se eluyen del cartucho; la estructura de poro ancho de la resina supermacroporosa permite usar caudales altos a bajas temperaturas con una contrapresión muy baja; la menor hidrofobicidad del copolímero funcionalizado con grupos fenilo permite un menor arrastre entre análisis.
Aplicaciones
Análisis rápido de mAb por LC-MS
El uso de Anticuerpos Monoclonales (mAbs) como productos biofarmacéuticos a aumentado rápidamente en la última década. Para que el proceso de caracterización por MS resulte económico los métodos han de ser de alta velocidad para permitir una identificación rápida de mAbs y permitir que las líneas celulares prometedoras puedan ser seleccionadas para desarrollo posterior.
Fase Móvil B: 80/20 (v/v) ACN/agua + 0.1% ácido fórmico.
La Figura 1 muestra que en 4 minutos es posible cargar y desalar un mAb intacto (Rituximab) con un análisis rápido de sólo 4 minutos. Las glicoformas del mAb ≥ 10% y ≥ 30% intacto se caracterizaron por MS hasta 100 y 300 veces, tal como muestra la Figura 2.
Análisis LC-MS de Fragmentos de mAb
Como se ve en la Figura 3 la Espectrometría de masas es una herramienta esencial en la caracterización de mAbs al ofrecer la determinación del peso molecular e información estructural de mAbs intactos y digeridos.
La inyección directa en MS es la aproximación más simple para caracterizar la muestra. La Figura 3 muestra el desalado, la separación y la caracterización por MS de fragmentos de anticuerpos monoclonales digeridos del mAb farmacéutico Rituximab. Los fragmentos Lc, Fc/2, y Fd’ del anticuerpo se separan y caracterizan por HRAMS (High Resolution Accurate Mass Spectrometry) .
Carga de Proteína y Arrastre
Es importante cargar una suficiente cantidad de proteína en el cartucho para obtener una señal suficiente para una caracterización efectiva por MS y conseguir un Espectro de Masas limpio. La Figura 4 muestra el espectro de una carga creciente de un mAb digerido y reducido de 0.1–10 μg de proteína total. El blanco obtenido tras una inyección de 10 μg de producto indica un desalado efectivo. Se puede ver también que, mientras que es común en RPC observar artefactos hidrofóbicos de la muestra como picos múltiples durante la etapa de lavado con 100% de fase móvil B, con el cartucho de desalado MSPac DS-10 no se observa ningún arrastre detectable tras la inyección de 10 μg de proteína.
Especificaciones Operativas
Guía Operativa
- Operar el cartucho en las Condiciones operativas antes descritas
- El cartucho puede ser cargado en cualquier dirección
- Use un mínimo de 4% de solvente orgánico en la fase móvil durante la carga, elución y lavado
- Para asegurar un enlace fuerte de la muestra, disuelva o diluya la muestra en Fase Móvil A altamente acuosa
- Equilibrado del cartucho antes del uso:
- Lavar el cartucho con Fase Móvil B durante 10 ‘ a 0.3 mL
- Lavar el cartucho con Fase Móvil A durante 10 ‘ a 0.3 mL/min
- Pasar al menos dos blancos antes de la primera muestra
Configuración del Sistema
Opción 1. Desalado de Muestra y elución al MS
Opción 2. Separación en Primera Dimensión con Desalado de Muestra y elución al MS en Segunda Dimensión
Opción 3. Colección de Fracciones en Primera Dimensión con Desalado de Muestra y elución al MS en Segunda Dimensión
Cómo Pedir
Cómo contactar con Cromlab
Para cualquier información adicional u oferta de productos contacte con nuestro Departamento Comercial.